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【行标】空气、物表、呕吐物采样办法 现场消毒点评规范-WST 797-2022

发布日期:2022-05-14 10:22:55 作者:乐虎直播NBA 点击:18

  本规范由国家卫生健康规范委员会消毒规范专业委员会担任技能检查和技能咨询,由我国疾病防备操控中心担任协调性和格局检查,由国家卫生健康委疾病防备操控局担任事务办理、法规司担任统筹办理。

  本规范起草单位:山东省疾病防备操控中心、我国疾病防备操控中心环境与健康相关产品安全所、江苏省疾病防备操控中心。

  本规范适用于感染病疫源地处理、突发公共卫生事件处置和严重活动卫生保证中环境、物品等的消毒作用点评。

  下列文件中的内容经过文中的规范性引证而构本钱规范必不可少的条款。其间,注日期的引证文件,仅该日期对应的版别适用于本规范;不注日期的引证文件,其最新版别(包含一切的修正单)适用于本规范。

  4.1.现场消毒点评的内容包含现场消毒进程点评和现场消毒作用点评。进行现场消毒作用点评前,应先进行现场消毒进程点评。

  4.2.现场消毒进程点评的内容包含消毒计划、消毒产品、消毒作业程序、个人防护。消毒计划拟定应依据消毒规模、消毒方针挑选合理的消毒办法和消毒产品。运用的消毒产品契合WS628等规范要求,在产品有用期内依照说明书规则的办法运用。消毒作业程序契合GB19193要求。依据病原微生物的损害程度和传达途径挑选个人防护配备。

  4.3.现场消毒作用点评包含现场点评和现场模仿点评。对严重活动卫生保证和方针微生物清晰的感染病疫源地、突发公共卫生事件进行现场消毒作用点评时,首选现场点评;对方针微生物无法检测、不明原因的感染病疫源地及突发公共卫生事件、危险等级较高的污染如炭疽杆菌、新冠肺炎病毒等进行消毒作用点评时挑选现场模仿点评。

  4.4.现场点评是以检测消毒方针上天然菌的存在数量或(和)方针微生物是否存在作为断定依据;现场模仿点评是以检测指示微生物是否存在或存在的数量作为断定依据。

  4.5.物体外表现场模仿点评依据病原微生物对消毒因子的抗力挑选相应的指示微生物。挑选大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌ATCC6538作为亲脂病毒、细菌繁衍体的指示微生物;挑选白色念珠菌ATCC10231作为致病性真菌的指示微生物;挑选龟分枝杆菌脓肿亚种CMCC93326或ATCC19977作为亲水病毒、人结核分枝杆菌的指示微生物;挑选枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC9372作为细菌芽孢的指示微生物;当产生不知道病原微生物及不明原因感染病时,挑选枯草杆菌黑色变种芽孢ATCC9372作为指示微生物。物体外表现场模仿点评已挑选抗力强的指示微生物进行点评时不再挑选抗力弱的指示微生物,除非有特殊要求。

  4.8.现场消毒作用点评应记载地址或方针、采样时刻、数量、采样者、样本编号、称号、查验目标及依据、查验成果及断定等信息。

  磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH7.2)、采样液(在PBS中参加相应中和剂)、中和剂(经判定试验合格者)、无菌棉签、无菌标准板(5.0cm×5.0cm)、胰蛋白胨大豆琼脂培育基等。

  以桌面、地上、墙面、床头柜、便器、门把手等高频率触摸物体外表为要点采样方针,在消毒因子难以抵达的当地如抽屉、地毯、墙角等可添加采样点,每类采样方针收集样本不少于2个。消毒前、后采样点应成对设置,不得在同一区域内进行。采样总数不少于30个。

  5.1.1.3.1.消毒前采样:用无菌标准板放在被检物体外表,用浸有采样液的棉签1支,在标准板内反正往复均匀涂擦各5次,并随之滚动棉签,以无菌操作办法将棉签采样端剪入盛有10mL无菌采样液的试管内。不适宜用标准板的小型物体外表(如儿童玩具、门把手、热水瓶把等)可按件采样。

  5.1.1.3.2.消毒后采样:消毒至设定时刻后,在消毒前采样点邻近类似部位或同类物体进行,其过程和办法同消毒前采样。

  消毒前、后样本于4h内送试验室进行检测。将采样管在混匀器上振动20s或用力振打80次,汲取1.0mL待检样品接种于无菌平皿,每一样本接种2个平皿,参加已溶化的45℃~48℃的胰蛋白胨大豆琼脂培育基15mL~18mL,边倾泻边摇匀,待琼脂凝结,置36℃±1℃,培育48h,记载菌落数,核算杀灭率。

  5.1.2.2.1.消毒前采样:将拟消毒房间的门窗关好,在无人条件下停止10min后,室内面积≤30㎡,在对角线点各放置一个无菌养分琼脂平板,高度为0.8m~1.5m,内、外部位应距墙面≥1m,翻开平板盖,露出必定时刻后盖好。各平板应做好符号。如室内面积>30㎡,每添加10㎡增设1个点。采样点应避开通风口、通风道等。

  5.1.2.2.2.消毒后采样:空气消毒抵达规则的时刻后,在消毒前采样的相同方位上,另放一组加相应中和剂的养分琼脂平板。放置办法和露出时刻与消毒前采样相同。同时取2个未经采样的相同平板作为阴性对照。

  消毒前空气天然菌均匀菌落数≤10CFU/(皿•10min)时,可不核算杀灭率,消毒后空气天然菌均匀菌落数≤4CFU/(皿•10min),判为消毒合格。

  消毒前、后按GB/T5750.2、GB/T5750.12采样和查验,消毒后水样查验时加相应的中和剂,按式(1)核算杀灭率。

  依照《消毒技能规范》(2002年版)2.1.1.2.4和WS/T683所示办法制备。载体应依据消毒方针及消毒因子的特性挑选,可选用金属片、玻璃片、棉布片等载体进行染菌,每个菌片的收回菌数应为1×106CFU/片~5×106CFU/片。

  依据现场状况,挑选桌面、地上、墙面及墙角、书柜、床底、房顶、抽屉等消毒因子难以抵达的当地布点。

  磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH7.2)、稀释液(含0.1%吐温80的PBS溶液)、中和剂、培育基(养分琼脂培育基、胰蛋白胨大豆琼脂培育基、分枝杆菌枯燥培育基、沙堡葡萄糖琼脂,麦芽浸膏琼脂等)、无菌棉签、无菌标准板(5.0cm×5.0cm)、无菌平皿等。

  5.2.5.1.1.5.现场消毒组:现场消毒作用点评人员依照生物安全防护等级采纳相应的防护办法后进入拟消毒现场,依照布点要求挑选现场物体外表较平的部位,于标准板中心空格内用无菌棉签沾以菌悬液均匀涂改现场什物外表,并予以暗号符号,待天然枯燥后由消毒人员进行现场消毒。每类物体布点不少于2个,总布点数量不少于30个。

  5.2.5.1.1.5.阳性对照组:另挑选与消毒现场类似的环境,与消毒前采样环境对应类别物体另行挑选区块人工染菌天然枯燥,不进行现场消毒,每类物体至少挑选2个阳性对照。

  5.2.5.1.2.采样及检测办法消毒完成后,用无菌棉签于含10mL中和剂试管中沾湿,别离对现场消毒组和阳性对照组布点区块进行涂改采样,每区块反正往复各5次,以无菌操作办法将棉签采样端剪入原中和剂试管内,振动混匀,于4h内送试验室进行检测。采样管在混匀器上振动20s或用力振打80次进一步混匀,恰当稀释后,汲取1.0mL接种平皿,每个样本接种2个平皿,参加已溶化的45℃~48℃的相应培育基15mL~18mL,边倾泻边摇匀,待琼脂凝结,置36℃±1℃培育,大肠杆菌和白色念珠菌培育48h、龟分枝杆菌脓肿亚种培育1周、细菌芽孢培育72h,计数存活菌落数(CFU/皿)。

  5.2.5.2.1.5.现场消毒组:现场消毒作用点评人员依照生物安全防护等级采纳相应的防护办法后进入消毒现场,将预先制备的1片染菌载体置于无菌平皿内,依照布点要求布点于消毒现场,布点数不少于30个,由现场消毒人员进行消毒。

  5.2.5.2.1.5.阳性对照组:另取4个无菌平皿,别离放入1片预先制备的染菌载体,放置于与消毒现场温湿度类似的环境中,不做任何消毒处理,作为阳性对照组。

  消毒作业完毕后,用无菌办法将现场消毒组和阳性对照组的载体别离取出移入含5.0mL中和剂试管中,于4h内送试验室进行检测。在混匀器上振动20s或用力振打80次,使载体上的菌被洗脱进入中和剂中,再放置10min以上,依照5.2.5.1.2的办法计数存活菌落数。

  大肠杆菌(8099)、微孔滤膜滤器和滤膜(滤膜孔径为0.45μm)、抽滤水泵或气泵、恒温水浴箱、品红亚硫酸钠培育基、中和剂(经判定合格)。

  5.3.2.1.取36℃±1℃培育18h~24h的新鲜大肠杆菌斜面,用稀释液洗下菌苔,恰当稀释配制成试验用大肠杆菌悬液。

  5.3.2.2.别离取拟消毒水样3份,每份500mL,参加大肠杆菌悬液,混匀,制备染菌水样。每份取适量水样进行过滤,滤完后,再抽气5s,封闭滤器阀门,用无菌镊子夹取滤膜边际,移放在品红亚硫酸钠培育基平板上。滤膜的细菌截留面朝上,滤膜与培育基彻底紧贴。将平板倒置,放于36℃±1℃,培育48h,计数滤膜上成长的大肠杆菌数,应在5×102CFU/100mL~2×103CFU/100mL。

  5.3.2.3.在3份染菌水样中别离参加消毒剂,敏捷混匀,使其抵达拟消毒浓度。消毒至规则时刻,每份水样别离移取2份,每份100mL,别离注入装有相应中和剂的无菌三角烧瓶中,以停止消毒作用。然后进行抽滤,办法同消毒前,计数滤膜上成长的大肠杆菌数。

  5.4.2.产生高致病性感染病时现场模仿点评宜挑选载体法,采样时不宜将平皿带出消毒现场,可用无菌镊子将载体直接取出移入试管中进行计数存活菌数,试管架、试管框等现场试验器件底部可衬托一次性运用的无菌用品,带出现场后立即对一切器件进行消毒。

  5.4.3.现场消毒作用点评采样及现场消毒人员应严厉依照生物安全防护等级做好个人防护。试验操作应依据有关规则做好防护办法,并在相应生物安全等级的试验室内进行,防止污染环境或感染操作者。

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